方案概述
前言：
異噻唑啉酮類防腐劑是一類高效、廣譜的化學(xué)防腐劑，屬于有機雜環(huán)類化合物，憑借獨特的化學(xué)結(jié)構(gòu)，具備強大的生物活性。在水溶液中，它會緩慢釋放出活性基團，這些基團能夠有效抑制和殺滅多種微生物，涵蓋細菌、真菌和藻類等。因其高效、廣譜的抗菌性能，異噻唑啉酮類防腐劑在眾多行業(yè)都備受青睞，廣泛用于工業(yè)和日化領(lǐng)域。
本次試驗參考《中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準SN/T 5723-2024》，采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3400系列配置紫外檢測器進行檢測。試驗結(jié)果顯示，系統(tǒng)適應(yīng)性中各組分峰峰型良好，分離度良好，滿足試驗要求；各組分峰線性相關(guān)系數(shù)R值在0.999以上；化合物MI、CMI、BIT、OI和DOCI保留時間重復(fù)性分別為0.040%、0.082%、0.075%、0.064%和0.052%；峰面積重復(fù)性分別為0.277%、0.492%、0.353%、0.371%和0.204%，重復(fù)性良好；在陰性樣品中添加5ppm和10ppm的標準品濃度，紙巾紙和衛(wèi)生紙中5種異噻唑啉酮類防腐劑的回收率均在90.54%~105.25%之間，回收率良好；MI、CMI、BIT、OI和DOCI的檢測限理論結(jié)果分別為28.46ng/mL、14.20ng/mL、35.50ng/mL、19.35ng/mL和57.35ng/mL；樣品測試某品牌紙巾紙和衛(wèi)生紙中均未檢出相應(yīng)的5種異噻唑啉酮類防腐劑；以上數(shù)據(jù)均滿足藥典方法對于儀器的要求。
關(guān)鍵詞：異噻唑啉酮類；防腐劑；高效液相色譜法
1.儀器設(shè)備及試劑
1.1液相配置清單
表1 高效液相色譜系統(tǒng)配置清單
|
序號 |
名稱 |
數(shù)量 |
|
1 |
UV3400 紫外檢測器 |
1臺 |
|
2 |
P3400B 四元低壓恒流泵 |
1臺 |
|
3 |
CT3400 柱溫箱 |
1臺 |
|
4 |
AS3400 全自動進樣器 |
1臺 |
|
5 |
SmartLab CDS 色譜使用工作站 |
1套 |
|
6 |
C18 250x4.6 mm，5 μm |
1個 |
1.2試劑及標準品清單
表2 試劑及標品清單表
|
序列 |
試劑及標準品 |
純度 |
|
1 |
甲醇 |
HPLC級 |
|
2 |
2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮（MI） |
98.3% |
|
3 |
5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮（CMI） |
99.6% |
|
4 |
1,2-苯并異噻唑啉-3-酮（BIT） |
99.8% |
|
5 |
2-正辛基-4-異噻唑啉-3-酮（OI） |
99.4% |
|
4 |
4,5-二氯-2-正辛基-4-異噻唑啉-3-酮（DOCI） |
99.7% |
1.3實驗材料及輔助設(shè)備
超聲波清洗機；
渦旋混合器；
分析天平；
2.實驗方法
2.1溶液配制
2.1.1 標準儲備溶液：分別精密稱取各標準品適量，置不同50mL容量瓶中，用甲醇溶解，分別制成200mg/L的標準儲備溶液。
2.1.2 標準工作液：分別精密移取各標準儲備溶液適量，置不同容量瓶中，用甲醇稀釋溶解并定容至刻度線，搖勻。（標準品濃度范圍2μg/mL~50μg/mL）
2.1.3 樣品溶液：精密稱取1g(準確至±0.01g)樣品至50mL具塞離心管中，加入20mL甲醇，渦旋混合均勻后，超聲提取30min，取上清液過0.22μm有機濾膜，上機測定。
2.1.4 回收率溶液1：精密稱取1g（準確至±0.01g）樣品至50mL具塞離心管中，加入各標準品儲備溶液1mL，再加入15mL甲醇，渦旋混合均勻后，超聲提取30min，取上清液過0.22μm有機濾膜，上機測定。
2.1.5 回收率溶液2：精密稱取1g（準確至±0.01g）樣品至50mL具塞離心管中，加入各標準品儲備溶液1mL，再加入35mL甲醇，渦旋混合均勻后，超聲提取30min，取上清液過0.22μm有機濾膜，上機測定。
3實驗結(jié)果
3.1專屬性
圖1 5種異噻唑啉酮類防腐劑色譜圖（10μg/mL、276nm）
圖2 5種異噻唑啉酮類防腐劑色譜圖（10μg/mL、316nm）
說明：20分鐘內(nèi)完成5種異噻唑啉酮類防腐劑的測定，各峰均有良好的峰型，分離度良好，符合試驗測定需求。
3.2線性范圍
圖3 5種異噻唑啉酮類防腐劑標準曲線圖
說明：取適量異噻唑啉酮類混合標準溶液，逐級稀釋到系列濃度制作標準曲線，線性范圍2~50μg/mL，各標準品線性相關(guān)系數(shù)R值均在0.999以上，各組分線性良好。
3.3重復(fù)性測試
圖4 6針標準品重復(fù)性測試疊加圖(10μg/mL)
表3 6針標準品重復(fù)性測試數(shù)據(jù)(10μg/mL)
|
化合物 |
保留時間（min） |
峰面積（mAU*s） |
|
2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮（MI） |
4.088 |
608.466 |
|
4.088 |
607.026 |
|
|
4.087 |
608.961 |
|
|
4.090 |
611.557 |
|
|
4.085 |
607.780 |
|
|
4.088 |
610.412 |
|
|
平均值 |
4.088 |
609.034 |
|
RSD(%) |
0.040 |
0.277 |
|
5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮（CMI） |
8.203 |
308.971 |
|
8.208 |
309.166 |
|
|
8.202 |
309.639 |
|
|
8.203 |
311.069 |
|
|
8.202 |
307.100 |
|
|
8.188 |
311.225 |
|
|
平均值 |
8.201 |
309.528 |
|
RSD(%) |
0.082 |
0.492 |
|
1,2-苯并異噻唑啉-3-酮（BIT） |
8.642 |
250.285 |
|
8.647 |
251.784 |
|
|
8.642 |
251.191 |
|
|
8.642 |
251.811 |
|
|
8.642 |
251.581 |
|
|
8.628 |
253.004 |
|
|
平均值 |
8.641 |
251.609 |
|
RSD(%) |
0.075 |
0.353 |
|
2-正辛基-4-異噻唑啉-3-酮（OI） |
10.610 |
418.527 |
|
10.615 |
416.020 |
|
|
10.610 |
419.761 |
|
|
10.608 |
417.854 |
|
|
10.610 |
420.475 |
|
|
10.595 |
418.345 |
|
|
平均值 |
10.608 |
418.497 |
|
RSD(%) |
0.064 |
0.371 |
|
4,5-二氯-2-正辛基-4-異噻唑啉-3-酮（DOCI） |
13.480 |
212.074 |
|
13.485 |
211.124 |
|
|
13.480 |
211.938 |
|
|
13.478 |
211.850 |
|
|
13.482 |
212.385 |
|
|
13.465 |
211.591 |
|
|
平均值 |
13.478 |
211.827 |
|
RSD(%) |
0.052 |
0.204 |
說明：化合物MI、CMI、BIT、OI和DOCI保留時間重復(fù)性分別為0.040%、0.082%、0.075%、0.064%和0.052%；峰面積重復(fù)性分別為0.277%、0.492%、0.353%、0.371%和0.204%，重復(fù)性良好。
3.4回收率測試
圖5 紙巾紙中5種異噻唑啉酮類防腐劑回收率測試疊加圖
表4 紙巾紙中5種異噻唑啉酮類防腐劑回收率測試數(shù)據(jù)
|
|
紙巾紙 |
|||
|
5ppm |
10ppm |
|||
|
化合物名 |
A |
回收率(%) |
A |
回收率(%) |
|
MI |
275.720 |
90.543 |
585.766 |
96.180 |
|
CMI |
147.330 |
95.197 |
308.252 |
99.588 |
|
BIT |
124.102 |
98.647 |
244.092 |
97.012 |
|
OI |
198.699 |
94.958 |
411.092 |
98.231 |
|
DOCI |
111.478 |
105.254 |
209.750 |
99.019 |
圖6 衛(wèi)生紙中5種異噻唑啉酮類防腐劑回收率測試疊加圖
表5 衛(wèi)生紙中5種異噻唑啉酮類防腐劑回收率測試數(shù)據(jù)
|
|
衛(wèi)生紙 |
|||
|
5ppm |
10ppm |
|||
|
化合物名 |
A |
回收率(%) |
A |
回收率(%) |
|
MI |
187.427 |
100.953 |
367.692 |
99.024 |
|
CMI |
94.944 |
97.151 |
190.771 |
97.603 |
|
OI |
127.046 |
98.894 |
253.581 |
98.695 |
|
DOCI |
64.740 |
98.286 |
130.279 |
98.893 |
|
BIT |
74.221 |
96.429 |
151.552 |
98.449 |
說明：在陰性樣品中添加5ppm和10ppm的標準品濃度，按照上述方法進行分析，5種異噻唑啉酮類防腐劑的回收率均在90.54%~105.25%之間，回收率良好。
3.5檢測限測試
圖7 異噻唑啉酮類防腐劑標準品測試譜圖(100ng/mL)
表6 異噻唑啉酮類防腐劑標準品測試數(shù)據(jù)(100ng/mL)
|
化合物名 |
保留時間(min) |
峰面積(mAU*s) |
信噪比 |
濃度（ng/mL） |
|
MI |
4.113 |
2.699 |
12.955 |
122.88 |
|
CMI |
8.218 |
2.144 |
21.044 |
99.60 |
|
BIT |
8.667 |
0.909 |
10.499 |
124.25 |
|
OI |
10.628 |
2.391 |
19.321 |
124.63 |
|
DOCI |
13.513 |
1.034 |
6.526 |
124.75 |
說明：根據(jù)上表5種異噻唑啉酮類防腐劑標準品測試數(shù)據(jù)，3倍信噪比為檢測限計算可知MI、CMI、BIT、OI和DOCI的檢測限理論結(jié)果分別為28.46ng/mL、14.20ng/mL、35.50ng/mL、19.35ng/mL和57.35ng/mL。
3.6某品牌紙制品測試
圖8 某品牌紙巾紙測試譜圖
圖9 某品牌衛(wèi)生紙測試譜圖
說明：某品牌紙巾紙和衛(wèi)生紙中均未檢出5種異噻唑啉酮類防腐劑。
4.結(jié)論
本次試驗參考《中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準SN/T 5723-2024》，采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3400系列配置紫外檢測器進行檢測。試驗結(jié)果顯示，系統(tǒng)適應(yīng)性中各組分峰峰型良好，分離度良好，滿足試驗要求；各組分峰線性相關(guān)系數(shù)R值在0.999以上；化合物MI、CMI、BIT、OI和DOCI保留時間重復(fù)性分別為0.040%、0.082%、0.075%、0.064%和0.052%；峰面積重復(fù)性分別為0.277%、0.492%、0.353%、0.371%和0.204%，重復(fù)性良好；在陰性樣品中添加5ppm和10ppm的標準品濃度，紙巾紙和衛(wèi)生紙中5種異噻唑啉酮類防腐劑的回收率均在90.54%~105.25%之間，回收率良好；MI、CMI、BIT、OI和DOCI的檢測限理論結(jié)果分別為28.46ng/mL、14.20ng/mL、35.50ng/mL、19.35ng/mL和57.35ng/mL；樣品測試某品牌紙巾紙和衛(wèi)生紙中均未檢出相應(yīng)的5種異噻唑啉酮類防腐劑；以上數(shù)據(jù)均滿足藥典方法對于儀器的要求。
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